1.药物
富乐克:80%延胡索酸泰妙菌素预混剂
2.试验用菌株
实验室保存的猪肺炎支原体临床分离菌株2株。
3.方法
3.1药物配制
(1)高效液相色谱法测定药物实际含量;
(2)根据药物实际含量配制储备药液(水溶解),药物浓度为μg/mL,0.22μm滤膜过滤除菌备用;
(3)使用前用猪肺炎支原体培养基进行倍稀释,稀释后药物浓度为1.μg/mL,备用。
3.2试验菌悬液的制备
(1)将冻存菌株进行复苏培养,至少传代培养3代;
(2)测定菌株ccu;
(3)将菌液稀释至ccu/mL,作为试验用菌悬液。
3.3试验方案
3.3.1测定方法
采用微量稀释法,取灭菌安瓿瓶12个,第1个为阴性对照(1mL培养基),第2个为药液对照(μL培养基+μL药液),第3-11个做药物梯度培养,每种药物均做平行试验,第12个为阳性对照(μL培养基+μL菌悬液)。
3.3.2操作步骤
(1)第1-12个安瓿瓶每个加μL培养基;
(2)第1个安瓿瓶加μL培养基,第2和第3个安瓿瓶分别加μL药液,混匀;
(3)混匀第3个安瓿瓶内培养液后吸取μL至第4个安瓿瓶,第4个安瓿瓶混匀后吸取μL至第5个,依次进行倍比稀释,至第11个,混匀后吸弃μL液体;
(4)第3-12个安瓿瓶加μL菌悬液,轻轻混匀,盖紧瓶盖后至温箱内培养。
3.3.3结果判定
培养过程中,每12h记录颜色变化。培养基颜色由红色变为黄色,说明有猪肺炎支原体生长,当阳性对照变为黄色而阴性对照和药物对照颜色无变化,而且连续2次肉眼观察的结果相同时,以未发生颜色变化的最低药物稀释浓度为完全抑制猪肺炎支原体生长的最低药物浓度(MIC)。
4.结果
据报道,猪肺炎支原体对影响蛋白质合成的药物都比较敏感。富乐克即延胡索酸泰妙菌素的作用机理主要为影响细菌蛋白质的合成,本实验中的2株猪肺炎支原体均对富乐克较为敏感,也验证了这一点。说明富乐克是治疗猪肺炎支原体感染的有效抗菌药物。
药敏试验结果图片
1.菌株1药敏试验结果
第6个未变色,第7个变色。MIC值为0.μg/mL。
2.菌株2药敏试验结果
第5个未变色,第6个变色。MIC值为0.μg/mL。
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