肺炎支原体是儿童及青少年社区获得性肺炎的重要致病菌之一，由于肺炎支原体感染的临床症状并不典型，无法与其他肺炎相区别，因此支原体肺炎的诊断主要靠实验室检测，常用的方法包括：支原体培养、血清学方法及分子诊断方法。
标本采集
采样时应注意尽量采用带塑料柄的尼龙拭子、涤纶拭子、植绒拭子或人造棉拭子，而不要采用带木柄的棉花拭子，因为后者可能含有抑制支原体生长及抑制分子反应的成分。
支原体培养
肺炎支原体培养通常采用SP4培养基，有液体和固体两种。在液体培养基中加有酚红，肺炎支原体水解葡萄糖使培养基pH值发生变化从而使培养基颜色发生变化。在固体培养基上，肺炎支原体呈典型的油煎蛋样菌落，培养法由于需要时间较长，很少用于临床诊断。
优点：
1.特异性高，阳性结果意味着%的特异性；
2.能获得致病菌株，可以进一步用于分型或药敏试验；
3.有商品化的培养基（SP4培养基）。
缺点：
1.由于支原体生长缓慢，培养时间较长，通常需要数天至数周；
2.对操作者技术要求较高；
3.敏感性较差，培养阳性率低。
血清学方法(最常用)
血清学检测方法是肺炎支原体诊断和流行病学调查的主要方法，检测的抗体包括IgM和IgG两种。通常在感染后5-7天可以测到肺炎支原体抗体，3周左右抗体滴度达到高峰，然后开始下降。急性期IgG抗体的阳性率低，恢复期IgG抗体阳性率可以达到82%。同样，在儿童患者中，急性期IgM抗体的敏感性80.8%，但利用急性期和恢复期双份血清检测时，IgM抗体的敏感性可以增加到88.6%。因此单独的一次血清学检测存在漏诊的风险。通过急性期IgM检测并结合临床症状进行确诊，给予患者合理用药并正确治疗。
优点：
1.有商品化试剂盒应用；
2.可以急性期快速检测并结合临床症状确诊；
3优化治疗方案；
缺点：
1.有可能出现假阴性；
2.通常需要结合临床症状才能确诊；
3.部分病人IgM抗体持续阴性或者IgG抗体持续增高会影响诊断。
分子诊断方法
最常用的分子诊断方法为PCR技术，针对肺炎支原体的ATP酶基因序列，P1粘附素基因序列及16SrRNA的保守区域等设计引物进行PCR扩增。同时实时定量PCR也可用于肺炎支原体的检测，与普通PCR相比，可以缩短样本周转时间，减少电泳等步骤。
优点：
1.有商品化试剂盒应用；
2.高灵敏度高特异性；
3.检测速度快，样本周转时间短，利于临床诊断及治疗；
4.可以对支原体菌株进行分子分型。
缺点：
1.价格比较贵；
2.需要特殊的设备和技术；
3.检测没有标准化，缺乏临床比较验证。
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